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植物TALENs基因編輯

瀏覽次數(shù):873|來源:飛凡檢測 | 2022-03-10 09:06:10

類轉錄激活因子效應物核酸酶(Transcription activator-like effector nucleases,TALENs)是一種多功能的基因組編輯工具,已在植物基因功能研究和育種中得到了廣泛的應用。與鋅指核酸酶(zinc finger nucleases,ZFNs)相比,該技術具有脫靶率低和細胞毒性低的優(yōu)點,TALENs采用簡單的蛋白質(zhì)- DNA識別機制。蘇州飛凡標準技術服務有限公司擁有豐富的植物基因編輯經(jīng)驗。

TALENs由DNA結合域和具限制性內(nèi)切酶活性的FokI組成(圖1)。DNA結合域通常由1.5-33.5個串聯(lián)重復序列組成。每個重復序列包含34個氨基酸,其中第12和第13個氨基酸為可變的,稱為“重復可變雙殘基”(repeat variable diresidues,RVDs),它們可特異性地識別一個核苷酸。簡而言之,RVDs的解碼機制是NI (Asn Ile)、HD (His Asp)、NN (Asn Asn)和NG (Asn Gly)可分別識別A、C、G、T(圖1)。由FokI組成的DNA切割域通常以二聚體的形式行使功能,且可切割序列從而造成DNA雙鏈斷裂。斷裂的DNA雙鏈一般通過非同源末端連接或同源重組修復兩種方式進行修復,修復過程中會在斷裂位點產(chǎn)生不同形式的突變:如點突變、缺失、插入、倒置、復制和易位等。

類轉錄激活因子效應物核酸酶的結構 

圖 1. 類轉錄激活因子效應物核酸酶的結構(Wei et al., 2013)。

蘇州飛凡可提供多種技術來實現(xiàn)TALE蛋白的定制合成,如限制性酶切連接法(restriction enzyme and ligation,REAL)、基于PCR的gold gate法(GG-PCR)、基于質(zhì)粒載體的GG法(GG-Vector)、高通量TALE合成技術(fast ligation-based automatable solid-phase high-throughput,F(xiàn)LASH)、迭代加帽組裝法(iterative capped assembly,ICA)、基于長粘末端的LIC(ligation-independent cloning)組裝法和單元組裝法(unit assembly,UA)等。我們還可以提供修飾的FokI,從而可以使它形成異源二聚體,提高剪切特異性。我們可以提供多種植物的遺傳轉化,如擬南芥、水稻、小麥、苜蓿、玉米、煙草和棉花等,可以滿足客戶的不同需求。

實驗流程

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