CHO-GS重組蛋白表達服務

 飛凡一直致力于重組蛋白表達與抗體制備研究。我們的科學家擁有豐富的哺乳動物蛋白重組表達、發(fā)酵和純化經驗，能夠快速為不同客戶制定定制化的蛋白哺乳細胞表達方案。

我們的哺乳動物重組蛋白表達可依托中國倉鼠卵巢細胞（Chinese Hamster Ovarian Cells ，CHO)，CHO細胞目前主要用于研究的有三種，分別是DUXB11 , DG44 , CHO-K1 。其中DUXB11與DG44屬于DHFR缺陷型， CHOK1為野生型。 CHO-S 為CHO-K1馴化后的懸浮細胞。使用 CHO 細胞進行蛋白表達時，最常使用兩種基因選擇系統(tǒng)：DHFR/MTX 和 GS/MSX。在飛凡提供的蛋白表達哺乳動物系統(tǒng)中，CHO 細胞表達系統(tǒng)參與了超過 70% 的重組生物制藥蛋白質的研究。 CHO-GS 細胞系是世界范圍內用于治療性抗體蛋白表達的流行的表達系統(tǒng)。

飛凡檢測實驗室提供的基于CHO 細胞重組蛋白表達系統(tǒng)主要使用無血清 CHO 培養(yǎng)基。 

CHO-K1細胞系：

親代 CHO 細胞系的亞克隆，來自成年中國倉鼠的卵巢。由于缺乏脯氨酸合成基因，細胞需要脯氨酸，生物合成鏈中的障礙在于將谷氨酸轉化為谷氨酰胺γ絲醛的步驟。它們會因霍亂毒素而發(fā)生形態(tài)變化。

應用：營養(yǎng)和基因表達研究倉鼠的 CHO-K1 細胞系已用于通過慶大霉素保護試驗研究質粒 pCM01 誘導對細菌與 CHO-K1 細胞結合的影響。它還可以在有或沒有乳酸的情況下培養(yǎng)，以測量細胞增殖的時間序列。

CHO表達的優(yōu)勢：

--CHO 細胞在復雜蛋白質的蛋白質折疊方面表現(xiàn)出色，具有準確的轉錄后修飾功能，表達的蛋白在分子結構、理化特性和生物學功能方面最接近于天然蛋白分子

--CHO 細胞可以在無血清細胞培養(yǎng)基中生長良好，消除了血清作為傳染源的潛在來源，提供了更高的安全性

--既可貼壁生長，又可以懸浮培養(yǎng)，且有較高的耐受剪切力和滲透壓能力

--具有重組基因的高效擴增和表達能力，外源蛋白的整合穩(wěn)定

--CHO 細胞的蛋白質產量很高——通?？梢赃_到2 – 6 g/L

--無血清培養(yǎng)基中的 CHO 細胞可輕松進行下游加工

--CHO 細胞可以瞬時或穩(wěn)定轉染以表達蛋白質

--在單克隆抗體的情況下，中國倉鼠卵巢 (CHO) 和 NS0 (小鼠骨髓瘤) 細胞是最常用的細胞系

GS系統(tǒng)工作原理：

圖1顯示了 GS 酶如何催化谷氨酸和氨生成谷氨酰胺，從而使細胞能夠復制。

當 CHO 細胞中的蛋白質表達系統(tǒng)有 GS 缺失時，研究人員用重組 DNA轉染CHO 細胞，該 DNA 由與 GS 基因密切相關的目的基因組成。甲硫氨酸亞砜胺 (MSX) 選擇系統(tǒng)用于選擇產生目標蛋白質的 CHO 細胞。 MSX 是一種類似于谷氨酸的藥物，可與 GS 結合，從而抑制谷氨酰胺的產生，而谷氨酰胺是細胞生長所必需的。在基因擴增過程中，CHO 細胞在高水平的 MSX 中培養(yǎng)。選擇具有目標基因的 GS 基因拷貝數(shù)增加的 CHO 細胞。GS 水平不足的 CHO 細胞會死亡。一旦選定，來自 CHO GS 陰性宿主的轉染細胞系不需要培養(yǎng)基中的 MSX。

表達系統(tǒng)的選擇：

DHFR 系統(tǒng)用于 CHO 細胞，其中突變型 CHO dhfr細胞系用含有靶基因和dhfr的載體轉染標記基因。選擇發(fā)生在不含次黃嘌呤、甘氨酸和胸苷的培養(yǎng)基中。同時，由于 MTX 能夠抑制 DHFR 酶，因此逐漸增加甲氨蝶呤 (MTX) 濃度以放大蛋白質產物的表達。GS 系統(tǒng)已用于 NS0 和 CHO細胞系，其中細胞用除 GS 基因外還含有目的基因的載體轉染。擁有GS基因的細胞可以合成自己的細胞內谷氨酰胺；因此，這些細胞可以在添加谷氨酸和天冬酰胺提供的氨基團的無谷氨酰胺培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

與 DHFR 系統(tǒng)相比，GS 選擇系統(tǒng)的一個優(yōu)點是細胞培養(yǎng)物產生的氨較少，這會對重組蛋白的糖基化產生負面影響；此外，GS 系統(tǒng)通常提供較短的選擇周期，因為該系統(tǒng)需要較低的基因拷貝數(shù)來實現(xiàn)類似的擴增轉基因表達水平。

GS-CHO系統(tǒng)的表達載體：

客戶提供：

飛凡檢測質檢報告流程：

1、 提供產品資料

2、 工程師根據您的產品推薦合適檢測項目，并給出報價

3、 確認報價沒有問題，然后把樣品送到我們實驗室

4、 支付檢測費用，安排檢測

5、檢測完成，出具檢測報告，郵寄給客戶

咨詢熱線：18018131362

關于飛凡

飛凡檢測致力于打造國內專業(yè)的第三方檢測服務公司，不斷優(yōu)化整合市場檢測資源，飛凡檢測與多家科研院所，如上海同濟大學，蘇州大學，SGS，TUV，以及國內眾多知名的檢測公司進行深度合作，共同為國內制造業(yè)服務，為中國的制造業(yè)開拓海外市場保駕護航，為我們日常生活的健康安全樹立標桿；公司目前工程師百余人，95%以上是本科以上學歷；我們合作的實驗室通過CNAS，CMA（EZ），所出具的任何一張報告都有CNAS，CMA資質，確保出具的每份報告都具有權威的法律效力。

為什么選擇我們

市場需求和成熟的模式給了我們成功的保證

相關文章