蛋白質(zhì)翻譯后修飾

蛋白質(zhì)翻譯后修飾組學(xué)產(chǎn)品

常規(guī)的蛋白質(zhì)組學(xué)研究往往只關(guān)注不同生理、病理條件下蛋白質(zhì)表達水平的變化。然而，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)，許多重要的生命活動、疾病發(fā)生不僅與蛋白質(zhì)的豐度相關(guān)，更重要的是被各類蛋白質(zhì)翻譯后修飾所調(diào)控。因此深入研究蛋白質(zhì)翻譯后修飾對揭示生命活動的機理、篩選疾病的臨床標(biāo)志物、鑒定藥物靶點等方面都具有重要意義。由于翻譯后修飾的蛋白質(zhì)在生物樣本中含量低、動態(tài)范圍廣，質(zhì)譜分析前需要對修飾進行富集以提高其豐度。

技術(shù)原理：

首先將蛋白樣本酶解成肽段混合物，然后使用液相色譜對酶解后的肽段混合物進行組分分離以降低樣本復(fù)雜程度，然后通過高質(zhì)量的修飾類抗體和生物材料對修飾肽段進行富集，最后上樣至液相色譜 - 串聯(lián)質(zhì)譜中進行分析，通過相應(yīng)的數(shù)據(jù)庫檢索匹配，一次可鑒定成百上千個修飾位點。

PTM蛋白質(zhì)修飾位點分析

技術(shù)原理：

＞ 蛋白質(zhì)磷酸化位點分析

樣品經(jīng)酶解后，用 TiO2 微球?qū)α姿峄亩芜M行富集，富集后的產(chǎn)物由質(zhì)譜分析，并通過軟件完

成數(shù)據(jù)檢索。

＞ 蛋白質(zhì) N- 糖基化位點分析

蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用凝集素（lectin）富集 N- 糖基化肽段，然后用 N- 糖酰胺酶（PNGase）在 H O 中

切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使 Asn 分子量增加 2.9890Da。最后用 LC-MS

質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段，并通過 MASCOT 軟件檢索數(shù)據(jù)庫，確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以

及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質(zhì)的 N- 糖基化位點。

定量磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)發(fā)生磷酸化是重要的翻譯后修飾，它與信號傳導(dǎo)、細(xì)胞周期、生長發(fā)育以及癌癥機理等諸多生物學(xué)問題有密切關(guān)系。研究蛋白質(zhì)磷酸化對闡明蛋白質(zhì)功能具有重要意義。將磷酸化肽段TiO2富集技術(shù)和iTRAQ/TMT/Lable free技術(shù)相結(jié)合，實現(xiàn)對磷酸化蛋白質(zhì)組學(xué)的定量研究。

技術(shù)原理

在磷酸化肽段富集前先進行 iTRAQ/TMT 標(biāo)記，然后通過 TiO2 富集方法獲得高純度的磷酸化肽段，最后結(jié)合高分辨率質(zhì)譜完成對樣品的定量分析。

定量N-糖基化蛋白質(zhì)組學(xué)

蛋白質(zhì)的N-糖基化位點修飾是重要的蛋白質(zhì)翻譯后修飾之一，主要在復(fù)雜的多細(xì)胞或組織形成過程中起關(guān)鍵作用。蛋白質(zhì)的N-糖基化修飾位點具有保守的氨基酸序列NX（S/T）（其中X為除脯氨酸以外的其它氨基酸）

凝集素親和法是目前糖蛋白質(zhì)組學(xué)中應(yīng)用廣泛的分離富集方法。凝集素（lectin）是一類糖結(jié)合蛋白質(zhì)，能專一識別某一特殊結(jié)構(gòu)的單糖或聚糖中特定的糖基序列而與

之結(jié)合，它們與糖鏈可逆非共價結(jié)合，糖蛋白或糖肽被凝集素捕獲之后，通常用特定的單糖通過競爭結(jié)合凝集素將糖蛋白或糖肽洗脫下來。蛋白質(zhì)經(jīng)過酶解后利用lectin 富集 N- 糖基化肽段，然后用 N- 糖酰胺酶（PNGase）在 H218O 中切除連接在天冬酰胺殘基（Asn）上的糖鏈。該處理致使 Asn 分子量增加 2.9890Da。最后用 LC-MS 質(zhì)譜儀檢測脫糖后的肽段，并通過 MASCOT 軟件檢索數(shù)據(jù)庫，確認(rèn)脫糖后分子量與其理論分子量的變化以及糖基化修飾肽段的序列，從而確定該蛋白質(zhì)的 N- 糖基化位點。N- 糖基化位點確定之后，再利用 label-free 的原理對其進行定量分析。

定量泛素化蛋白質(zhì)組學(xué)

泛素化是指泛素分子在一系列特殊的酶作用下，將細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)分類，從中選出靶蛋白分子，并對靶蛋白進行特異性修飾的過程。

技術(shù)原理

樣品經(jīng)胰蛋白酶 Trypsin 酶切，酶切產(chǎn)物由泛素化特異性抗體 (Cell Signaling Technology 5562S)進行泛素化肽的富集，富集后由質(zhì)譜 Q Excative（Thermo Scientific）分析，分析數(shù)據(jù)由生物信息學(xué)軟件進行數(shù)據(jù)檢索。

分析內(nèi)容

組間相關(guān)性圖

KEGG富集分析

GO富集分析

飛凡檢測質(zhì)檢報告流程：

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  1、 提供產(chǎn)品資料

• 2、 工程師根據(jù)您的產(chǎn)品，推薦合適檢測項目，并給出報價

• 3、 確認(rèn)報價沒有問題，然后把樣品送到我們實驗室

• 4、 支付檢測費用，安排檢測

• 5、檢測完成，出具檢測報告，郵寄給客戶

• 咨詢熱線：18018131362

• 關(guān)于飛凡

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